BCA  微量蛋白濃度測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
貨號(hào)：PC0050
規(guī)格：500 微孔(500T)/1000 微孔(1000T)/2000 微孔（2000T）
保質(zhì)期：本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。
產(chǎn)品內(nèi)容：
包裝 500  微孔 1000  微孔 2000  微孔 保存
BCA 試劑 100ml 2×100ml 4×100ml 室溫
Cu 試劑 3ml 6ml 12ml 室溫
PBS 稀釋液 30ml 60ml 120ml 室溫
BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn) (5mg/ml BSA) 0.3ml 0.5ml 1ml -20℃
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
堿性條件下，蛋白將Cu 2+ 還原為Cu + ， Cu + 與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測(cè)定其在 562nm處的吸收
值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢
測(cè)結(jié)果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類(lèi)的影響。實(shí)驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋
液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
操作說(shuō)明：
一 . 微孔酶標(biāo)儀法
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按 50 體積 BCA 試劑加 1 體積 Cu 試劑（50:1）配制成 BCA
工作液，充分混勻(混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失)。BCA 工作液室溫 24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：先用 PBS 將 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋終濃度為 0.8mg/ml 備用。再依次稀釋 80、40、20、
10、5、2.5ug/ml.。
3. 高濃度蛋白可將樣品作適當(dāng)稀釋?zhuān)ǘ嘧鰩讉€(gè)梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋?zhuān)?，由于移液器
在取小量時(shí)的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn)前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn) 1/2 后。
4. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液和 40ul 稀釋后的蛋白或標(biāo)準(zhǔn)品溶液，對(duì)照孔加入 PBS 稀釋液。37
℃放置 4 小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定 A562nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水
分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。
二 . 分光光度計(jì)法
如沒(méi)有酶標(biāo)儀，在離心管中混勻樣品后加入比色皿，用分光光度計(jì)比色。
采用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度方法與酶標(biāo)儀法相似， 只需要按照分光光度計(jì)比色皿容量要求按照比例
配置相應(yīng)的 BCA 工作液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
常規(guī)比色皿用量為 200ul 有樣本加入 1mlBCA 工作液或 400ul 樣本加入 2mlBCA 工作液。微量比色皿
用量為 20 樣本加入 100ul BCA 工作液?；蚋鶕?jù)儀器情況自行調(diào)整。
附：樣本及標(biāo)準(zhǔn)品稀釋示意圖
樣本管號(hào)  A  B  C  D  E
PBS 稀釋液用量  180  100  100  100  ……
標(biāo)準(zhǔn)品用量  20（原液） 100（從 A 管吸出） 100（從 B 管吸出） 100（從 C 管吸出） ……
終濃度（ug/ml） 80  40  20  10  ……
注意事項(xiàng)：
1. 長(zhǎng)期不用時(shí)，Cu 試劑與 PBS 稀釋液可置于 2-8℃保存，如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。BCA 試劑在低
溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時(shí)，可 37℃溫育使其*溶解, 不影響使用。
2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時(shí)，請(qǐng)采用 Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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