品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號(hào) | BC3320 |
規(guī)格 | 50T/24S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)檢測 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號(hào):BC3320
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑三:臨用前用8 mL蒸餾水溶解備用。
試劑四:臨用前用8 mL蒸餾水溶解備用。
標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL 磷標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前用蒸餾水稀釋16倍至0.625 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
工作液的配制:試劑二中加入5 mL試劑一充分溶解備用??梢詫⒐ぷ饕悍盅b后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
定磷試劑的配制:按H2O:試劑三:試劑四:試劑五(V:V:V:V)=2:1:1:1的比例配制,配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
產(chǎn)品說明:
葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)是一種水解磷酸化合物的磷酸酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中,是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無機(jī)磷,利用鉬藍(lán)法測定無機(jī)磷含量的增加,即可反映G6P活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng):
建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
若A大于1或者顯色完成后有沉淀產(chǎn)生,將上清液或者粗酶液用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定。
定磷試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,正常顏色為淺黃色,如有變色或變藍(lán)則均為失效。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
取0.1g小鼠肌肉組織加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得A測定管=0.913、A對(duì)照管=0.869、A空白管=0.014、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.509,計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管=0.913-0.869=0.044,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.509-0.014=0.495,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
G6P(U/g 質(zhì)量)=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=312.5×0.044÷0.495÷0.1=277.7778 U/g 質(zhì)量。
取0.1g稗草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得A測定管=0.379、A對(duì)照管=0.237、A空白管=0.014、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.509,計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管=0.379-0.237=0.142,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.509-0.014=0.495,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
G6P(U/g 質(zhì)量)=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=312.5×0.142÷0.495÷0.1=896.4646 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):
Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA -ation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0730/BC0735 *酸羧化酶(PC)活性檢測試劑盒
BC0920/BC0925 果糖-1,6-二磷酸(酯)酶(FBP)活性檢測試劑盒
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)檢測試劑盒 糖異生 葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)檢測試劑盒 糖異生