直鏈淀粉含量檢測(cè)試劑
盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC4260
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：*50 mL自備；

2. 試劑四：提供125mL空瓶一個(gè)；將試劑三：H₂O =9 mL：91 mL混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配，2-8℃保存半年；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg直鏈淀粉。臨用前加入0.1 mL無(wú)水乙醇和0.9 mL試劑三，混勻后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10 mg/mL的直鏈淀粉，2-8℃保存半年。

產(chǎn)品說(shuō)明：
直鏈淀粉是D-葡萄糖基以α-(1,4)糖苷鍵鏈接的多糖鏈，直鏈淀粉含量影響著食品的食用品質(zhì)和外觀品質(zhì)，與食品安全息息相關(guān)。
直鏈淀粉和碘形成藍(lán)色絡(luò)合物，利用乙醇分開(kāi)樣本中的可溶性糖和淀粉，再用碘與其反應(yīng)得到直鏈淀粉含量。

技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.006 mg/mL
線性范圍：0.0125-0.6 mg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、天平、臺(tái)式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、*、無(wú)水乙醇、EP管、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 稱取0.01g烘干樣本，加入1mL試劑一，充分勻漿；

2. 80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀；

3. 在步驟2沉淀中加入1mL試劑二（*）振蕩 5min；3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀；

4. 在步驟3沉淀中加入5mL試劑四充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后3000g，25℃離心5min，取上清待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)雙波長(zhǎng)至550nm和485nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取40μL 10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入960μL試劑四，充分混勻，配制成0.4mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）

3. 操作表 (在1.5mL離心管中依次加入下列試劑) ：

三、直鏈淀粉含量計(jì)算
直鏈淀粉含量（mg/g 質(zhì)量）=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V樣總÷W=2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，0.4mg/mL；V樣總：加入試劑四體積，5mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：

1. 反應(yīng)后建議在20min內(nèi)檢測(cè)完成防止褪色。

2. 若A測(cè)定大于1，建議樣本上清用試劑四稀釋后再進(jìn)行測(cè)定；若A測(cè)定低于0.03時(shí)，可以提取時(shí)減少試劑四體積進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.01g烘干玉米于研缽中研碎，加入 1mL試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑二（乙*）振蕩5min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入5mL試劑四充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后3000g，25℃離心5min，取上清，之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=（A測(cè)定-A空白）-（A’測(cè)定-A’空白）=（0.664-0.003）-（0.474-0.034）=0.221，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）-（A’標(biāo)準(zhǔn)-A’空白）=（0.723-0.003）-（0.447-0.034）=0.307，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：直鏈淀粉含量（mg/g 質(zhì)量）=2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=143.97 mg/g質(zhì)量。

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