大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
用純化的MT抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的MT抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品用途:僅供科研使用
檢測(cè)范圍:15.6 pg/ml - 1,000 pg/ml
特 異 性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)
大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP) ELISA試劑盒操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)**樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ,注意不要有氣泡,加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效
性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37 溫育1小時(shí)。
3、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時(shí)。
5、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90 ,酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯時(shí),即可終止)。
7、 每孔加終止溶液50 ,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物 液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
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