6-磷酸葡萄糖酸
脫氫酶（6PGDH）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
貨號(hào): BC2100
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前配制，加入5 mL試劑一，混勻；

2. 試劑三：臨用前配制，加入5 mL試劑一，混勻。

產(chǎn)品說(shuō)明：
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）依次催化NADPH合成，與能量的平衡、生長(zhǎng)速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP⁺生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP⁺沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340nm吸光度增加速率，計(jì)算6PGDH活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 樣本處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在提取當(dāng)日完成酶活性測(cè)定，粗酶液避免反復(fù)凍融；

2. 試劑二和試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用，當(dāng)天未用完試劑保存在4℃，可保存1周。

3. 若樣本初始（0s）讀值大于0.5且ΔA測(cè)定小于0.1，可嘗試將樣本進(jìn)行稀釋后測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱(chēng)約0.1g腎臟組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清稀釋10倍，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.256-0.154=0.102，ΔA空白=A2空白-A1空白=0，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

6PGDH酶活性(U/g 質(zhì)量) =536×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷W×10（稀釋倍數(shù)）=5467.2 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Wu S, Wang H, Li Y, et al. Transcription factor YY1 promotes cell proliferation by directly activating the pentose phosphate pathway[J]. Cancer research, 2018, 78(16): 4549-4562.

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