品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC0860 |
規(guī)格 | 50T/24S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 測定意義:土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
土壤酸性蛋白酶活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC0860
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑六 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前加入10 mL試劑六,沸水浴攪拌溶解后待用,用不完的試劑2-8℃保存1個月。
標準品:20μmol/mL 酪*酸溶液。
產(chǎn)品說明:
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化,其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解,與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。酸性條件下,土壤酸性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪*酸;在堿性條件下,酪*酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍,在680nm有特征吸收峰。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、臺式離心機、研缽、蒸餾水、30-50目篩。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至680nm,蒸餾水調(diào)零。
標準溶液的稀釋:取10μL 20μmol/mL酪*酸標準液,加入990μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.2μmol/mL標準液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實驗中每管需要220μL,為減小實驗誤差,故配制大體積。)
樣本測定
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣(g) | 0.1 | 0.1 | - | - |
試劑一(μL) | 200 | 200 | - | - |
試劑二(μL) | 100 | - | - | |
充分混勻后,37℃水浴/恒溫培養(yǎng)箱中反應24h,期間振蕩5-6 次,使土樣與反應液充分接觸。 | - | - | ||
試劑三(μL) | 200 | 200 | - | - |
試劑二(μL) | - | 100 | - | - |
混勻,10000rpm 室溫離心10min,取上清液待測 | - | - | ||
上清液(μL) | 220 | 220 | - | - |
0.2μmol/mL標準液(μL) | - | - | 220 | - |
蒸餾水(μL) | - | - | - | 220 |
試劑四(μL) | 650 | 650 | 650 | 650 |
試劑五(μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
混勻,40℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)10min,10000rpm室溫離心10min,取上清液于680nm下讀取各管吸光值A,分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管,計算ΔA測定=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。(標準管、空白管只需測1-2次,每個測定管需設一個對照管) |
三、土壤酸性蛋白酶活性計算
單位定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol的酪*酸為一個土壤酸性蛋白酶活力單位。
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)=C標準×ΔA測定÷ΔA標準×V反總÷W÷T=0.1×ΔA測定÷ΔA標準÷W
C標準:標準管濃度,0.2μmol/mL;V反總:反應體系總體積,0.5mL;T:反應時間,1d;W:樣本質(zhì)量,g。
注意事項:
當吸光值大于1時,建議將上清液用蒸餾水稀釋后進行測定,計算時注意乘以稀釋倍數(shù)。
實驗實例:
分別稱取2份0.1g土樣于1.5mLEP管中,分別為對照管及測定管。按照測定步驟操作,使用1mL玻璃比色皿測定吸光度,計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.206-0.178=0.028,ΔA標準=A標準管-A空白管=0.540-0.028=0.512,按土壤質(zhì)量計算酶活得:
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測定÷ΔA標準÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g土樣。
分別稱取2份0.1g三葉草土樣于1.5mLEP管中,分別為對照管及測定管。按照測定步驟操作,使用1mL玻璃比色皿測定吸光度,計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.831-0.612=0.219,ΔA標準=A標準管-A空白管=0.540-0.028=0.512,按土壤質(zhì)量計算酶活得:
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測定÷ΔA標準÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0270/BC0275 土壤中性*白酶活性檢測試劑盒
BC0880/BC0885 土壤堿性蛋白酶(S-ALPT)活性檢測試劑盒
土壤酸性蛋白酶活性檢測試劑盒