植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC1520

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前將試劑三倒入使其充分溶解備用。該試劑溶解后10天內(nèi)有效。

2、 試劑二：臨用前加2 mL蒸餾水充分溶解。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg半*氨酸，臨用前加入1.157 mL提取液，得到1000 μg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素。氨態(tài)氮進(jìn)入植物細(xì)胞后形成氨基酸或酰胺，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通過測定570nm吸光度，來計算氨基酸含量。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：5.5847 μg/mL

線性范圍：25-300 μg/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 將1000μg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液用提取液分別稀釋為300、200、100、50、25μg/mL。

3. 操作表：

混勻后蓋緊瓶蓋封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保溫10min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，將測定管8000rpm離心5min后取上清，于570nm測定吸光值。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。計算ΔA=A測定管-A空白管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。

三、植物氨態(tài)氮含量計算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個氮標(biāo)準(zhǔn)液為橫坐標(biāo)，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA帶入方程中，得到x（μg/mL）。

2. NH₃-N含量的計算：

（1）按樣本質(zhì)量計算：NH₃-N含量（μg/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W

（2）按蛋白濃度計算：NH₃-N含量（μg/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提?。?/span>=x÷Cpr

W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；V提取：樣本提取液總體積，1mL。

注意事項：

為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實驗，如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

[1] Fuyuan Zhu,Moxian Chen,Wailung Chan,et al. SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses. Journal of Proteomics. September 2018; (IF3.537)

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